关岭牛MyoDⅠ基因启动子报告质粒的构建及活性验证

作者：李飞; 许厚强; 陈伟; 陈祥; 刘敏; 桓聪聪

来源：基因组学与应用生物学, 2013, (04): 459-466.

• MyoDⅠ基因
• 启动子
• 荧光素酶
• C2C12
• 3T3-L1 MyoD Ⅰ genes
• Promoter
• Luciferase
• C2C12
• 3T3-L1

为了克隆关岭牛MyoDⅠ基因启动子并验证其启动活性,根据GenBank中牛的MyoDⅠ基因序列设计PCR引物,用PCR技术扩增牛MyoDⅠ基因的启动子,构建重组克隆载体pUCmT-MyoDⅠ;并通过PCR扩增、限制性酶切、测序及生物信息学分析对阳性克隆进行鉴定;构建报告质粒pGL3-MyoDⅠ,并将其转染小鼠C2C12、3T3-L1细胞系,检测其24h后的双荧光素酶活性。实验结果获得了关岭牛MyoDⅠ基因启动子,其序列长度为993bp,并成功构建了MyoDⅠ启动子报告质粒;双荧光素酶活性检测表明pGL3-MyoDⅠ在小鼠C2C12细胞中的表达是pGL3空载体40.65倍,在小鼠3T3-L1细胞中的表达是空载体的1.13倍,MyoDⅠ启动子在小鼠C2C12细胞中的表达高于3T3-L1细胞(**p<0.01)。结果表明关岭牛MyoDⅠ基因启动子具有启动活性,在小鼠骨骼肌细胞中特异性表达。

• 单位
  生命科学学院; 贵州大学