兔卵母细胞成熟过程中组蛋白H3Ser10磷酸化表达分析

摘要

为研究卵母细胞成熟过程中组蛋白H3第10位丝氨酸(H3Ser10)磷酸化变化规律及其表达水平,本研究以体外成熟兔卵母细胞为材料,采用免疫荧光标记方法检测兔卵母细胞成熟各时期组蛋白H3Ser10磷酸化的动态分布,同时探讨不同浓度组蛋白磷酸化激酶抑制剂(ZM447439)处理卵母细胞对组蛋白H3Ser10磷酸化表达的影响。结果显示:(1)兔卵母细胞组蛋白H3Ser10磷酸化始于生发泡破裂期(GVBD),且表达水平最高;第1次减数分裂中期(MⅠ期)磷酸化水平降低,第1次减数分裂后期(AⅠ期)及第2次减数分裂中期(MⅡ期)磷酸化水平呈上升趋势,但均比GVBD期低。(2)低浓度ZM447439对兔卵母细胞核成熟进程影响不大,当其浓度增加到30μmol/L时,93.5%的卵母细胞停留在GVBD期。(3)ZM447439浓度为5μmol/L时,20.7%卵母细胞H3Ser10去磷酸化,其他卵母细胞H3Ser10磷酸化信号与未处理组相似;当ZM447439浓度增加到30μmol/L时,大多数卵母细胞中的H3Ser10磷酸化消失。以上结果表明:兔卵母细胞组蛋白H3Ser10磷酸化始于GVBD期,且一直持续到MⅡ期,GVBD期磷酸化水平最高。ZM447439可有效抑制兔卵母细胞减数分裂的恢复,且随其浓度的增加,组蛋白H3Ser10磷酸化水平降低;当浓度达30μmol/L时,卵母细胞组蛋白H3Ser10终止磷酸化。

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