DEK蛋白C末端DNA结合域的原核表达、纯化及其与DNA的结合活性

作者：华颖; 胡红刚; 彭向雷

来源：中国生物工程杂志, 2009, (08): 14-18.

• DEK蛋白
• C末端DNA结合域
• 原核表达
• 纯化
• 凝胶迁移实验

DEK蛋白C末端DNA结合域(简称CDB)是近年新发现的一个DEK蛋白与DNA的结合域,其中含有多个磷酸化位点,与DEK蛋白的功能密切相关。利用原核表达系统表达DEK蛋白的CDB肽段并进行纯化,具体为以pET-30a(+)为载体质粒,E.coliBL21(DE3)为宿主细胞,构建重组基因工程菌,以IPTG诱导目的蛋白的表达,用Ni-NTA纯化的重组蛋白样品来进行SDSPAGE电泳分析,约在10.7kDa处出现明显的特征蛋白条带。凝胶迁移分析证实DEK蛋白C末端DNA结合域与DNA的结合倾向于与超螺旋型DNA相结合,同全长的DEK蛋白与DNA的结合具有类似的特点,表明DEK蛋白C末端DNA结合域在DEK蛋白与DNA的结合中可能具有一定的作用。

• 单位
  北京交通大学