应用实时荧光定量PCR研究BBTV DNA1在香蕉不同组织中的含量

作者：ZHOU Peng; YU Naitong; ZHANG Shaoyan; HU Jiayi; LIU Zhixin; College of Agriculture Hainan University; Institute of Tropical Bioscience; Biotechnology Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences Key Laboratory of Biology; Genetic Resources of Tropical Crops Ministry of Agriculture

来源：热带作物学报, 2014, 35(07): 1388-1392.

DOI：10.3969/j.issn.1000-2561.2014.07.023

• 香蕉束顶病毒
• 实时荧光定量PCR
• 病毒含量

为准确定量香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)DNA1组分在香蕉组织中的分布和含量,建立以SYBR Green-I荧光染料为标记的实时荧光定量PCR(Real Time Fluorescence Quantitative PCR)方法。利用B1-F/B1-R引物扩增海南BBTV DNA1组分并构建到pMD18T sample载体,再以B2-F/B2-R引物测定该质粒的标准曲线,其线性方程为Y=-3.247×LOG(X)+8.01,相关系数r2=0.997,扩增效率为103.2%,标准质粒检测灵敏度约为214 copies/μL。分别选取染病香蕉的嫩叶、叶鞘、假茎和球茎各100 mg,提取DNA并进行实时荧光定量PCR检测。结果表明:病株各部位均含BBTV病毒,但含量有明显差异,其中嫩叶(3.08×108 copies/mg)>叶鞘(2.50×108 copies/mg)>假茎(1.29×108 copies/mg)>球茎(1.67×107 copies/mg),呈依次递减。

• 单位
  中国热带农业科学院 热带生物技术研究所; 中国热带农业科学院热带生物技术研究所; 海南大学