滤纸挑选克隆方法在筛选稳定表达细胞株中的应用

作者：谢晓斌; 陈小卫; 龙捷; 张燕青; 张雅洁

来源：Chinese Journal of Cancer Prevention and Treatment, 2010, (11): 801-804.

• 抗体
• 单克隆
• 血管内皮生长因子C
• 基因表达
• 细胞系
• 肿瘤 antibodies
• monoclonal
• vascular endothelial growth factor C
• gene expression
• cell line
• tumor

目的:利用滤纸挑选克隆方法简单、有效地筛选稳定表达VEGF-C shRNA的乳腺癌MCF-7细胞株。方法:用已构建的表达VEGF-C shRNA的重组质粒载体pSIREN-VEGF-C转染乳腺癌MCF-7细胞,利用嘌呤酶素筛选阳性克隆;以滤纸法挑选阳性克隆并扩大培养成稳定表达的细胞株;荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测稳定表达的细胞株中VEGF-C的表达情况。结果:用滤纸法挑选并培养出的稳定表达细胞株中,VEGF-C的mRNA及蛋白表达均明显下调,抑制率分别为95%及100%,P<0.05。结论:利用滤纸挑选克隆方法成功筛选稳定表达VEGF-C shRNA的乳腺癌MCF-7细胞株,并将其命名为M...

• 单位
  广州医学院