青枯菌诱导的花生根全长cDNA文库的构建

Authors：张冲; 曾建斌; 陈华; 姜宝杰; 贺小彦; 庄伟建

Source：热带作物学报, 2013, (10): 1941-1946.

• 花生
• 青枯病
• SMART技术
• cDNA文库 Peanut
• Bacterial wilt(Ralstonia solanacearum)
• SMART system
• cDNA libraty

以优质抗青枯病花生品种闽花8号为材料,在苗期利用灌根法接种花生青枯菌,分不同时期取根,利用改良的CTAB-LiCl法提取接种和非接种的混合RNA,采用SMART(Switching Mechanism At 5′end of RNA Transcript)技术合成双链cDNA,经SfiⅠ酶切后胶回收纯化双链cDNA,连接到质粒载体pDNR-LIB上,电击转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,成功构建了青枯菌诱导的处理和对照混合全长cDNA文库。经鉴定,初级文库库容为1.78×106cfu/mL,重组率达到99%以上,插入片段集中在750~2 500 bp之间,平均长度约为1 300 bp,经扩增后的文库滴度为2.97×109cfu/mL。随机挑取部分克隆测序,利用生物信息学软件进行初步分析获得一些EST数据。说明得到了高质量的全长cDNA文库,这为筛选和克隆青枯菌诱导的胁迫相关基因提供了资源基础。

• Institution
  福建农林大学; 生命科学学院