橡胶草基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

作者：李若霖; 崔百明; 王颖; 张秀春; 陈雄庭; 吴坤鑫

来源：中国农学通报, 2011, (27): 239-244.

• 橡胶草
• DNA提取
• RAPD
• 反应体系

为探索适合橡胶草基因组DNA的提取方法和RAPD反应体系。采用改良CTAB法提取橡胶草叶片总DNA,得到的DNA能满足RAPD分析需要。通过单因子实验法分析DNA浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Taq聚合酶以及Mg2+浓度对RAPD扩增结果的影响,建立了适合于橡胶草RAPD分子标记的最佳反应体系,即20μL体系中包括:模板DNA30ng、TaqDNA聚合酶1.75U、dNTPs浓度0.25mmol/L、Mg2+浓度2.0mmol/L、引物浓度0.5μmol/L、10×PCRBuffer2.0μL。RAPD扩增反应程序为:94℃预变性5min,94℃30s,37℃30s,72℃70s,45个循环,最后72℃延伸7min。该反应体系具有较好的稳定性及可重复性。

• 单位
  海南大学; 生命科学学院; 石河子大学; 中国热带农业科学院 热带生物技术研究所; 中国热带农业科学院热带生物技术研究所