源于红树林土壤宏基因组文库的新型磷脂酶A_1基因的筛选、克隆表达及酶学性质

摘要

【目的】利用宏基因组学的方法从红树林土壤中筛选新型酯水解酶类。【方法】构建红树林土壤宏基因组文库,采用以三丁酸甘油酯为底物的功能筛选方法,对筛选出的阳性克隆进行系统发育树分析,实现新型磷脂酶A1基因的原核表达,研究重组酶的酶学性质。【结果】筛选到一个新的磷脂酶A1编码基因phop1413(GenBank登录号KF767097),测序表明其全长1413bp,可编码470个氨基酸残基,表达蛋白约51.7kD,表达量高达220mg/L,NCBI中BLAST比对及系统进化树分析显示该蛋白属于磷脂酶类的FAMILYⅥ家族;酶学性质分析表明,该重组酶的最适反应底物为对硝基苯酚己酸酯,比酶活为124U/mg...

关键词