lncRNA FGD5-AS1调控miR-761影响骨肉瘤细胞增殖、迁移和凋亡的机制研究

摘要

目的探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）中含有5个PH结构域的反义RNA1（PH domain containing 5 antisense RNA 1,FGD5-AS1）和可能机制对骨肉瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法收集2016—2018年在本院接受手术的30例骨肉瘤患者的骨肉瘤组织和瘤旁组织标本,男18例,女12例;年龄7～69岁,平均年龄（20.2±1.29）岁。采用逆转录定量聚合酶链式反应（reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR）检测FGD5-AS1的表达水平。将骨肉瘤细胞U2OS分为转染小干扰RNA阴性对照（si-NC）组、转染si-FGD5-AS1（si-FGD5-AS1）组、转染si-FGD5-AS1和miRNA模拟物阴性对照（si-FGD5-AS1+miR-NC）组、转染si-FGD5-AS1和miR-761 mimics（si-FGD5-AS1+miR-761）组、转染si-FGD5-AS1和miRNA抑制物阴性对照（si-FGD5-AS1和anti-miR-NC）组和转染si-FGD5-AS1和miR-761抑制物（si-FGD5-AS1和anti-miR-761）组。噻唑蓝（methyl thiazolyltetrazolium, MTT）法、集落形成实验、流式细胞术分别检测细胞活力、克隆形成能力和细胞凋亡。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR确定FGD5-AS1对miR-761的靶向调控作用。结果与瘤旁组织比较,骨肉瘤组织中FGD5-AS1的表达水平显著升高（P<0.05）。与si-NC组比较,si-FGD5-AS1组U2OS细胞存活率、克隆形成数、迁移细胞数显著降低,细胞凋亡率显著升高（P<0.05）。与si-FGD5-AS1+miR-NC组比较,si-FGD5-AS1+miR-761组U2OS细胞存活率、克隆形成数、迁移细胞数显著降低,细胞凋亡率显著升高（P<0.05）。与si-FGD5-AS1和anti-miR-NC组比较,si-FGD5-AS1和anti-miR-761组U2OS细胞存活率、克隆形成数、迁移细胞数显著升高,而细胞凋亡率显著降低（P<0.05）。FGD5-AS1对miR-761具有靶向负性调控作用。结论骨肉瘤中FGD5-AS1呈高表达。抑制FGD5-AS1通过上调miR-761可抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。

关键词