应用细菌人工染色体技术体外繁殖人巨细胞病毒

作者：谢斌华; 王波; 丁俊彩; 胡兢晶; 郭媛媛; 苏海浩

来源：中华临床医师杂志(电子版), 2013, (11): 4939-4943.

• 电穿孔
• 巨细胞病毒
• 转染
• 染色体
• 人工
• 细菌 Electroporation
• Cytomegalovirus
• Transfection
• Chromosomes
• artificial
• bacterial

目的体外快速繁殖人巨细胞病毒(HCMV)。方法用试剂盒抽提、纯化重组HCMV细菌人工染色体(BAC),以重组HCMV细菌人工染色体(BAC-HCMV)为模板扩增UL82基因,酶切后连接至pcDNA载体,构建pcDNA-pp71重组质粒,转化感受态宿主菌,抽提及鉴定重组质粒。通过电穿孔技术将BAC-HCMV与鉴定成功的pcDNA-pp71重组质粒共转染人包皮成纤维细胞,通过多重PCR法及观察细胞病变效应、绿色荧光蛋白等方法鉴定培养后获得的HCMV。结果 (1)获得pcDNA-pp71重组质粒,经PCR及双酶切后,片段大小与预期相符,进一步测序鉴定成功。(2)BAC-HCMV与pcDNA-pp71共转染人包皮成纤维细胞,出现细胞病变效应,经荧光显微镜观察可见绿色荧光。(3)以培养出的病毒DNA为模板进行多重PCR扩增,获得两条与预期大小相符的条带,鉴定HCMV体外繁殖成功。结论应用BAC技术成功在体外快速繁殖HCMV,为HCMV研究提供实验材料,也为进一步研究HCMV分子机制奠定基础。

• 单位
  广州医学院