本发明公开了包含II型内含子的DNA分子,其中所述II型内含子不表达内含子编码的逆转录酶但包含经修饰的反向的选择性标记基因,其中所述标记基因包含正向的I型内含子,从而在梭菌纲细菌细胞中引起表达,并且其中所述DNA分子包含容许将所述II型内含子的RNA转录本插入到梭菌纲细菌细胞的基因组中的序列。本发明还提供了将核酸分子引入到梭菌纲细菌细胞中的DNA分子的位点的方法。所述DNA分子和方法可用于在梭菌中产生突变。