C端序列的删除对非出血重组蛇毒纤溶酶的影响

作者：马涛; 邱鹏新; 颜光美

来源：中山大学学报(医学科学版), 2005, (04): 404-408.

• 蛇毒纤溶酶
• 重组
• 金属蛋白酶
• C端序列
• 删除 snake venom fibrin(ogen)olytic enzyme
• recombinant
• metalloprotease
• C-terminal sequence
• deletion

【目的】研究C端序列对非出血重组纤溶酶(rFⅡ)特异性、活性和热敏感性的影响。【方法】通过SOEingPCR方法构建删除C端序列的突变体,突变体和rFⅡ分别在P.pastoris中诱导表达。表达和纯化的蛋白用SDS-PAGE和Westerenblot进行鉴定。之后分析其生化特性。【结果】rFⅡ及突变体通过SDS-PAGE和Westerenblot得到证实。生化分析揭示:①突变体对显色底物N-(p-Tosyl)-Gly-Pro-Lys-pNA的催化效率(Kcat/Km)是rFⅡ的1.9倍;②突变体和rFⅡ对氧化的胰岛素B链拥有共同的优先裂解位点,可是在随后的裂解中开始展现差异;③突变体显示了更高...