iTRAQ结合2DLC-MS/MS技术筛选前列腺癌差异表达蛋白

作者：孙传玉; 赵晓君; 徐可; 苟元成; 丁炜宏; 胡青峰; 夏国伟; 丁强

来源：中华临床医师杂志(电子版), 2013, (13): 5818-5822.

• 前列腺肿瘤
• 蛋白质组学
• 同位素标记相对和绝对定量技术
• 二维液相色谱-串联质谱技术 Prostatic neoplasms
• Proteomics
• Isobaric tags for relative and absolute quantitation
• Two-dimensional liquid chromatography-tandem mass spectrometry

目的应用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)结合二维液相色谱-串联质谱技术(2DLC-MS/MS)筛选前列腺癌差异表达蛋白。方法将前列腺穿刺活检的组织标本分为三组:良性前列腺增生组(20例)、前列腺癌组(20例)以及前列腺上皮内瘤组(10例)。对这些组织标本进行蛋白提取、定量和酶解。iTRAQ标记后(其中114标记良性前列腺增生组,116标记前列腺癌组,117标记前列腺上皮内瘤组),进行2DLC-MS/MS分析。利用ProteinPilot软件(版本3.0)对MS/MS肽段进行分析,在International Swissprot(090210,human)数据库中搜寻蛋白并定量。差异表达蛋白界值设定:大于1.5倍或小于0.66倍且P<0.05认为二者之间存在显著差异表达。Western-blot进一步验证了TPD52、Prohibitin-2、EF-Tu、Decorin的表达。结果总共鉴定出760种蛋白。相对于良性前列腺增生,前列腺癌差异表达蛋白共有46个,其中有20个蛋白明显上调,26个蛋白明显下调。Western-blot的验证结果与这些蛋白的表达变化相符合。结论通过iTRAQ技术分析得到的前列腺癌差异表达蛋白可靠,iTRAQ技术为筛选出有意义的前列腺癌生物标记物提供了一个良好的平台。

• 单位
  上海中医药大学; 复旦大学