番石榴焦腐病菌LAMP检测方法的建立及应用

作者：吴敏亮; 张溢溪; 兰成忠; 刘裴清; 李本金; 陈庆河; 翁启勇

来源：植物病理学报, 2013, (06): 574-580.

• 番石榴
• 葡萄座腔菌
• 内转录间隔区
• 环介导等温扩增
• 钙黄绿素 Psidium guajava
• Botryosphaeria rhodina
• internal transcribed spacer
• loop-mediated isothermal amplification
• calcein

以钙黄绿素(calcein)为指示剂,建立了番石榴焦腐病菌(Botryosphaeria rhodina)的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)可视化快速检测方法。在该方法中,以番石榴焦腐病菌特异的核糖体转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列为目的 DNA片段,设计4条引物(2条内引物、2条外引物),优化LAMP反应条件和反应体系,并进行特异性和灵敏度验证。研究确定最佳反应温度为64℃,反应时间1 h;特异性检测结果显示,15株不同地理来源的番石榴焦腐病菌和10份番石榴焦腐病病果组织LAMP产物均为阳性(绿色),而26株其它病原菌及10份健康番石榴果实组织LAMP产物均为阴性(橘黄色);灵敏度验证结果显示,该方法的检测灵敏度在DNA水平上可达到10 pg。实验结果表明,快速、准确、灵敏的LAMP检测方法适合基层部门及田间检测番石榴焦腐病菌使用。

• 单位
  福建农林大学; 福建省农业科学院植物保护研究所