融合蛋白IL6-OmpW的质粒构建及表达纯化

作者：黄浦江; 黄郁葱; 简纪常; 吴灶和; 鲁义善; 黄瑜; 樊云霞

来源：广东海洋大学学报, 2013, (04): 43-48.

• 哈维氏弧菌OmpW
• 红笛鲷IL-6
• 基因融合
• 原核表达 Vibrio harveyi OmpW
• Lutjanus sanguineus IL-6
• Gene-SOEing
• Prokaryotic expression

以重组质粒pMD18-T/IL6和pMD18-T/OmpW为模板,分别扩增红笛鲷IL-6基因和哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因,运用PCR重叠延伸剪切技术,将IL-6和OmpW基因融合,将融合基因定向克隆到原核表达载体pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白高效表达,融合蛋白分子质量约为66.6 ku。优化后表达条件为温度37℃,IPTG浓度0.2 mmol·L-1,诱导时间5 h。用HisTrap HP亲和柱纯化重组蛋白,最佳咪唑洗脱浓度为400 mmol·L-1,纯化蛋白的质量浓度为480μg·mL-1。Western...

• 单位
  广东海洋大学; 仲恺农业工程学院