内质网应激/蛋白激酶样内质网激酶/DNA损伤诱导因子153通路在七氟烷致大鼠海马神经元细胞凋亡中的作用

作者：刘颖; 夏中元; 刘康; 江梦

来源：中华实验外科杂志, 2019, 36(9): 1618-1621.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2019.09.026

• 七氟烷
• 海马神经元
• 脱噬作用
• 特异性抑制剂

目的 观察内质网应激/蛋白激酶样内质网激酶(PERK)/DNA损伤诱导因子153(CHOP)通路在七氟烷致新生大鼠海马神经细胞凋亡中的作用.方法 (1)按照海马神经元暴露在3％七氟烷不同时间长度分为4组:对照组(Control组)、七氟烷暴露1h组(Sev1组)、七氟烷暴露3h组(Sev2组)、七氟烷暴露6h组(Sev3组),用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组海马神经元凋亡蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-12、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)以及内质网应激蛋白PERK、CHOP的蛋白表达;(2)将海马神经元分为4组:对照组(Control组)、七氟烷暴露6h组(Sev组)、加入内质网应激特异性抑制剂牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA) 100 μmol/L并暴露于3％七氟烷6h组(Sev T组)以及加入TUDCA 500 μmol/L暴露于3％七氟烷6h组(Sev HT组).采用Western blot的方法评估各组细胞凋亡蛋白Caspase-12、bax的表达.(3)将海马神经元分为5组:对照组(Control组)、暴露于3％七氟烷6h组(Sev组),经PERK小干扰RNA(siRNA)转染并暴露于3％七氟烷6h组(PERK siRNA),经CHOP siRNA转染并暴露于3％七氟烷6h组(CHOPsiRNA),以及加入TUDCA 100 μmol/L并暴露于3％七氟烷6h组(TUDCA组).利用Western blot的方法对比分别加入内质网应激特异性抑制剂TUDCA、PERK siRNA、CHOP siRNA后凋亡蛋白Caspase-12、bax的表达.应用SPSS 20.0统计软件分析,组间比较采用单因素方差分析.结果 (1)海马神经元暴露在3％七氟烷3h及6h后均出现亡蛋白Caspase-12、bax以及内质网应激蛋白PERK、CHOP的蛋白表达的上调(3组bax表达分别是1.00±0.00、3.20 ±0.42、4.10 ±0.51,F=76.450,Caspase-12表达分别是1.00±0.00、3.30±0.34、5.20±0.41,F=214.500;PERK表达分别是1.00±0.00、3.20±0.31、5.10 ±0.29,F=307.800;CHOP表达分别是1.00±0.00、2.80 ±0.31、4.90±0.33,F=247.800,P＜0.05);(2)七氟烷引起的细胞凋亡加入不同浓度内质网应激特异性抑制剂TUDCA后,细胞凋亡蛋白Caspase-12、bax较之前下调(Caspase-12:5.20±0.41、3.90 ±0.35、2.30 ±0.13,F =315.500;bax:4.10 ±0.51、3.70±0.29、2.20 ±0.21,F=38.760;P＜0.05),且高浓度TUDCA下调细胞凋亡表现更明显(Caspase-12:5.20±0.41比2.30 ±0.13,bax:4.10 ±0.51比2.20±0.21,P＜0.05);(3)PERK抑制剂PERK siRNA、CHOP抑制剂CHOPsiRNA均可不同程度地下调Caspase-12、bax凋亡蛋白的表达.Sev、PERK siRNA、CHOPsiRNA3组bax分别是4.10±0.51、2.90±0.32、3.50±0.23,F=12.470,Caspase-12分别是:5.20 ±0.41、3.60 ±0.11、2.90 ±0.36,F=61.030,P＜0.05.结论 内质网应激在七氟烷致海马神经细胞凋亡中起着重要的作用,抑制内质网应激可以抑制七氟烷引起的海马神经元凋亡.

• 单位
  武汉大学