家蚕滞育生物钟蛋白质EA4基因的cDNA克隆和序列分析

作者：王玉军; 徐世清; 司马杨虎; 吴阳春; 刘莹; 柳学广; 丛海峰

来源：蚕业科学, 2007, (1): 36-42.

DOI：10.3969/j.issn.0257-4799.2007.01.007

• 家蚕
• 滞育
• 时间间隔测定酶
• 酯酶A4基因
• cDNA序列

家蚕滞育生物钟是依赖卵内酯酶A4(EA4)的倒计时型生物钟.EA4是具时间间隔测定酶(time interval measuring enzyme,TIME)功能的蛋白质.根据家蚕EA4测定的氨基酸序列,以第3天龄雌蛹脂肪体和卵巢总RNA为模板,利用简并引物RT-PCR方法,得到308 bp的部分ea4序列,其1-144 nt和145-308 nt分别与家蚕全基因组鸟枪序列(whole genome shotgun sequence,WGS) AADK01019126.1的5 595-5 738 nt及WGS AADK01014467.1的8 636-8 473 nt有95%和98%的一致性.根据获得的ea4基因片段序列,利用生物信息学方法和家蚕基因组数据预测了ea4基因的完整cDNA序列,设计特异引物,以雌蛹脂肪体和卵巢RNA为模板,进行RT-PCR得到完整的cDNA.ea4基因的cDNA全长519 bp,其中1-48 bp为信号肽序列,49-519 bp编码的氨基酸与蛋白质纯化后测序EA4部分的一致性为98%,C末端存在3个氨基酸的差异,其中第156位为新确定氨基酸.