利用TALENs技术建立基因定点修饰的猪Oct-4-EGFP细胞系

作者：刘畅; 冯冲; 宋志强; 李西睿; 王宁; 储明星; 潘登科

来源：中国畜牧兽医, 2013, (11): 1-6.

• Oct-4-EGFP
• TALENs
• 同源重组
• 猪
• 干细胞
• 多能性 Oct-4-EGFP
• TALENs
• homologous recombination
• pig
• stem cell
• pluripotency

本研究旨在建立一个用于干细胞示踪的报告体系,将EGFP cDNA及两侧带有LoxP位点的neo抗性基因插入五指山小型猪内源性Oct-4基因的终止密码子处,以Oct-4基因完整的5′调控区启动EGFP的表达,为猪干细胞研究提供有价值的工具。试验定制了针对猪Oct-4终止密码子的TALENs,与打靶载体共转染猪耳成纤维细胞,药物筛选得到抗性克隆点514个,经过PCR鉴定,共获得杂合阳性克隆点36个,打靶效率分别为5.6%和13.0%。本研究成功获得了Oct-4-EGFP转基因细胞系,并证明了TALENs技术可以明显提高同源重组效率。

• 单位
  中国农业科学院; 东北农业大学