非洲栖热腔菌(Thermosipho africanus)纤维寡糖磷酸化酶的结晶及衍射分析

摘要

为探究非洲栖热腔菌（Thermosipho africanus）纤维寡糖磷酸化酶TaCDP底物宽泛性的结构基础,通过Ni离子亲和层析-阴离子交换层析-凝胶过滤层析3步法纯化TaCDP,采用气相扩散法筛选TaCDP晶体,利用X-射线晶体学方法对TaCDP的晶体结构进行了研究。结果表明,纯化后TaCDP蛋白的纯度高,聚集状态均一,在2. 2 mol·L-1（NH4）2HPO4,0. 1 mol·L-1CHES-NaOH,p H值9. 2,10. 0 g·L-1polyvinylpyrrolidone K15条件下筛选到TaCDP与纤维三糖底物的复合物晶体。该晶体经同步辐射收集衍射数据后分辨率可达0. 28 nm,晶体空间群属于P4122,晶胞参数为a=b=9. 928 nm,c=56. 251 nm,表明1个不对称单位有2个TaCDP分子。

关键词