产肠毒素大肠杆菌双重PCR检测方法的建立

作者：曲泽慧; 陈佩佩; 张爱芹; 郭东春; 林欢; 姜骞; 刘家森; 师东方; 曲连东

来源：中国畜牧兽医, 2013, (07): 65-68.

• 产肠毒素大肠杆菌
• 双重PCR
• K88菌毛
• K99菌毛 enterotoxigenic Escherichia coli
• double PCR
• K88 fimbriae
• K99 fimbriae

为了快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88和K99)基因,本研究设计合成了针对K88、K99的2对特异性引物,对扩增条件进行优化,建立了检测K88和K99的双重PCR方法。该方法对K88、K99基因的扩增产物大小分别为237和314bp;最终确定dNTP终浓度0.4mmol/L,K88、K99的引物终浓度均为25μmol/L,退火温度为52℃。试验结果表明,该方法具有良好的灵敏性和特异性。用所建立的双重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果显示,K88单重PCR阳性2株,K99单重PCR阳性3株,K88和K99双重PCR阳性5株。本研究建立的双重PCR检测方法为致幼畜腹泻产肠毒素大肠杆菌的快速准确检测提供了方法。

• 单位
  东北农业大学; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 黑龙江八一农垦大学