弗氏柠檬酸杆菌RPA-LFD快速检测方法的建立及应用

作者：王姝然; 范厚勇; 徐嘉楠; 周天琦; 许丹; 郑跃平^*

来源：大连海洋大学学报, 2023, 1-14.

DOI：10.16535/j.cnki.dlhyxb.2023-200

• 弗氏柠檬酸杆菌
• 快速检测
• 重组酶聚合酶扩增技术
• 侧向流动试纸条

为建立一种针对弗氏柠檬酸杆菌的敏感性高、特异性强的临床快速检测方法，根据弗氏柠檬酸杆菌定居因子基因cfa的保守序列，设计特异性重组酶聚合酶扩增技术(RPA)扩增引物，采用RPA结合琼脂糖凝胶电泳(AGE)和侧流层析试纸条(LFD)的方法进行反应条件的优化、特异性及灵敏度检测。结果表明：本研究中所建立的弗氏柠檬酸杆菌RPA-LFD快速检测方法，在38 ℃扩增20 min后能特异性地检测到弗氏柠檬酸杆菌，对弗氏柠檬酸杆菌纯培养物和基因组DNA的最小检出限1.5×102 cfu/mL和200 fg/μL，是常规PCR灵敏度的10倍；利用所建立的RPA-LFD与常规PCR同时检测杂交鲟攻毒实验样品，两种方法的检测结果一致。研究表明，通过对RPA反应条件的探索和优化，成功建立了弗氏柠檬酸杆菌重组酶聚合酶扩增结合侧向流动试纸条(RPA-LFD)方法，该方法操作简便，反应迅速，特异性好，灵敏度高，并且不需要昂贵的仪器，该方法可为未来弗氏柠檬酸杆菌细菌性疾病的早期诊断提供更有效的技术支持。