一种含精-甘-天冬氨酰三肽人纤溶酶原K区缺失突变体在巴斯德毕赤酵母中的表达、纯化与特性

摘要

为获得具有抗血小板聚集作用的重组人纤溶酶原(hPLG),尝试了一种含有精-甘-天冬氨酰(RGD)三肽的hPLG K区缺失突变体(RGD-hPLG-?K)。首先,从pDNR-LIB-HPLG中克隆出HPLG-?K。然后定点突变激活环内的Pro559为Asp559,形成RGD模序。构建的pPICZαA-RGD-HPLG-?K电转化巴斯德毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达后可产生0.16 g/L培液的RGD-hPLG-?K,Ni-NTA层析后纯度可达90%以上;Western blotting证实所获RGD-hPLG-?K可与兔抗hPLG抗血清反应;其24 h尿激酶激活速率和纤溶活性与hPLG-?K无显著差别(P=0.630,n=5);经尿激酶激活后,RGD-hPLG-?K的血小板聚集抑制率(21.8%±1.57%)显著高于hPLG-?K(3.8%±0.33%)(P=0.000,n=5)。表明成功构建、表达了一种具有抗血小板聚集活性的hPLG突变体,为研究新型多功能溶栓药物奠定了基础。

关键词