人血小板生成素基因的克隆及CHO稳定细胞系的建立

作者：马倩倩; 宋玲玲; 王红梅; 方永志; 王立群; 何洪彬

来源：家畜生态学报, 2013, (02): 15-18.

• 人血小板生成素
• 基因克隆
• CHO稳定细胞系
• Western blot human thrombopoietin
• gene clone
• CHO stable cell lines
• Western blot

以人肝cDNA为模板克隆了人血小板生成素(Human Thrombopoietin,hTPO)基因,利用基因重组技术构建了带有新霉素抗性基因(neo)筛选标记的pcDNA3.1(+)-hTPO真核表达载体,将重组质粒瞬时转染293T细胞,用鼠抗人TPO单抗Western blot检测TPO蛋白的瞬时表达;再将重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary,CHO),应用400μg/mL的G418筛选克隆,经PCR及Western blot验证,获得了3株hTPO蛋白表达水平不同的CHO细胞系,为获得大量蛋白并进行活性功能试验及临床应用奠定基础。

• 单位
  山东省农业科学院; 东北农业大学; 生命科学学院