基于滚环扩增技术的DNA水凝胶用于大肠杆菌O157: H7的可视化快速检测

作者：张彤; 陶晴; 卞晓军; 陈谦; 颜娟

来源：CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY, 2021, 1-15.

DOI：10.19756/j.issn.0253-3820.201744

• 滚环扩增技术
• DNA水凝胶
• 核酸适配体
• 食源性疾病
• 食品安全

以大肠杆菌O157: H7（Escherichia coli O157: H7， E. coli O157: H7）为研究模式菌，构建了基于醛基化磁珠（Aldehyde magnetic beads， AMBs）、滚环扩增技术（Rolling circle amplification， RCA）和DNA水凝胶可视化快速检测的适配体生物传感器（Aptasensor），用于食品安全检测。制备了Mbs@dsDNA（double-stranded DNA， dsDNA）杂交复合物，当待测物中含有E. coli O157: H7时，其与磁珠表面的适配体序列发生特异性识别，将含有引发序列的适配体链释放至上清液中，通过磁响应分离收集上清液，上清液中的适配体引发探针与成环序列杂交形成挂锁探针，添加T4 DNA连接酶、phi 29 DNA聚合酶和dNTPs等引发RCA；当待测物中不含E. coli O157: H7时，无法引发RCA。本研究使用两条成环序列，其部分碱基互补。这两条成环序列的挂锁探针经过RCA后生成两条可部分互补杂交的长单链DNA（Single-stranded DNA， ssDNA）产物，两管ssDNA产物振荡孵育，可形成裸眼可见的DNA水凝胶，从而实现E. coli O157: H7的可视化检测。本方可法在1 h内实现最低浓度为4×103 CFU/mL的E. coli O157: H7的可视化检测，检测时间可低至30 min，具有较高的灵敏度和特异性，且操作简便、快速，不需要大型仪器，在食品安全检测方面具有潜在的应用前景。

• 单位
  上海海洋大学