大豆天冬酰胺合成酶B基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

摘要

根据GenBank登陆大豆天冬酰胺合成酶(AS-B)基因序列(登录号:GMU55874)设计特异引物,通过PCR扩增从大豆(Glycine max)cDNA中克隆出AS-B基因。将该基因克隆到pET30a(+)载体,构建重组表达载体pET30a-AS,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)pLysS,并进行表达条件优化。结果表明,在16℃条件下,经0.5mmol·L-1IPTG诱导14 h,大部分重组AS-B以可溶性蛋白的形式存在。经Ni-NTA亲和层析和Sephadex G50脱盐后,重组蛋白产率为23.4 mg·L-1,纯度>90%,以L-谷氨酰胺和NH4Cl为氮源供体时,其比活力分别为2.32和2.60μmol·min-1.mg-1。研究结果为研究大豆AS-B结构与功能和酶催化动力学机制及建立AS-B抑制剂的高通量筛选平台奠定基础。

关键词