单核增生性李氏杆菌溶血素的原核表达及可溶性分析

Authors：杜丽娟; 胡永浩

Source：吉林农业大学学报, 2012.

• 单增李氏杆菌
• 溶血素
• hlyA 基因
• 原核表达
• 可溶性蛋白

对单核增生性李氏杆菌的主要毒力基因 hlyA 进行大肠杆菌原核表达，分析其表达蛋白的可溶性并纯化。根据 hlyA 基因设计特异性引物，细菌煮沸破裂提取基因组，PCR 扩增出目的条带。连接转化至克隆载体 pMD18-T，测序正确后连接表达载体 pET-30a( + )，酶切和 PCR 鉴定正确后转化至 BL21(DE3)，构建重组质粒 pET-30a-hlyA。IPTG 诱导表达蛋白，并分析其可溶性。PCR 扩增的 hlyA 基因全长约 1600bp，成功构建了重组质粒 pET-30a-hlyA，转化大肠杆菌诱导表达了溶血素蛋白，SDS-PAGE 分析表达产物，结果显示表达的蛋白分子量约为 60kD，以可溶性和包涵体两种形式存在，且以可溶性为主要形式。成功克隆和表达了单核细胞增多性李氏杆菌 hlyA 基因和溶血素蛋白，并得到纯化蛋白。

• Institution
  Gansu Agricultural University