绿色荧光蛋白原核表达载体的构建

作者：赵轶君; 董浩; 潘红艳; 徐芳; 赵佳; 步怀宇; 李红民

来源：华北农学报, 2013, (03): 73-76.

• 绿色荧光蛋白
• 原核表达载体
• pMAL-c2X
• 筛选标记 GFP
• Prokaryotic expression
• pMAL-c2X vector
• Screening marker

为开发以绿色荧光蛋白(GFP)为基因的原核表达载体,根据NCBI基因序列设计引物,通过PCR扩增获得GFP编码基因,经限制性核酸内切酶消化后将GFP定向克隆至原核表达载体pMAL-c2X中malE基因下游的EcoRⅠ与HindⅢ位点之间,与malE基因融合为一个表达框。重组产物转化E.coli TB1感受态细胞,在添加有50 mg/mLAMP、10μmol/L IPTG的LB平板上于37℃培养12～16 h后放置于25～30℃的培养箱中继续培养4～6 h,365 nmUV照射下挑取转化克隆,经扩大培养后用IPTG诱导GFP的表达并用SDS-PAGE检测表达效率。结果表明,融合在麦芽糖结合蛋白下...

• 单位
  西北大学; 生命科学学院