人内皮抑素endostatin基因的融合表达纯化及活性测定

作者：杨芳何援利刘芸

来源：世界华人消化杂志, 2005, (13): 72-75.

• 人内皮抑素基因
• 融合表达
• 活性
• 逆转录-聚合酶 链反应
• MTT法 Human endostatin gene
• Fusion expression
• Activity
• Reverse transcription polymerase chain reaction
• MTT assay

目的:获得有活性的人内皮抑素(endostatin)融合蛋白. 方法:从人胎肝组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出endostatin基因,定向克隆重组入pTRX表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达,纯化,MTT法测定endostatin蛋白对人脐带静脉血管内皮细胞的抑制活性. 结果:RT-PCR获得endostatin基因,扩增产物在10 g/L 琼脂糖凝胶上显示为1条扩增条带,约573 bp,与预计大小一致.将PCR产物连入PGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α,阳性克隆经KpnⅠ,NotⅠ酶切鉴定、测序验证.构建pTRX-endo表达...

• 单位
  南方医科大学