PCV2 ORF2基因在大肠杆菌中的表达及ELISA检测方法的建立

摘要

采用PCR扩增了猪圆环病毒Ⅱ型广东分离株的ORF2 3′端基因,将其连接到pET32a(+)质粒上并转化DH5α细胞,重组质粒经PCR和酶切鉴定并测序后,转化BL21菌,用1 mmol/L IPTG诱导表达重组菌。经SDS-PAGE和Western-blot分析,表明ORF2基因已在大肠杆菌中正确表达,表达的融合蛋白的分子质量约为33 ku;表达产物经超声波处理后,用Ni-NTA柱纯化,复性,用此纯化产物包被酶标板,建立了ELISA诊断方法,经对临床516份血清样品进行检测,结果表明仔猪的血清阳性率为35.2%,育肥猪的血清阳性率为60.6%,种猪的血清阳性率为69.8%。

关键词