创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及在食品检测中的应用

作者：曾静; 程晋霞; 张蕾; 张琳; 张海予; 魏海燕; 刘雪松; 曹栋

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2013, (10): 1068.

• 创伤弧菌
• 鞭毛蛋白
• 单克隆抗体
• 双抗夹心ELISA Vibrio vulnificus
• flagellin
• monoclonal antibody
• double-antibody sandwich ELISA

目的制备创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体(mAb)并建立双抗夹心ELISA。方法采用差速离心法提取创伤弧菌ATCC 1.1758菌株的鞭毛蛋白,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠,抗血清效价达到1∶32 000时,取脾细胞与生长良好的对数期Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。采用杂交瘤技术和ELISA制备并筛选分泌mAb的杂交瘤细胞株,有限稀释法对阳性孔克隆化培养。制备腹水,纯化以得到抗体。结果获得5株持续、稳定分泌抗创伤弧菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株,命名为VVNo.1~VVNo.5,抗体效价高达1∶(2×106)。SDS-PAGE结果显示,提取出的鞭毛蛋白相对分子质量(M r)为44 000并且纯度较高。采用VVNo.5抗体建立了创伤弧菌双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到103CFU/mL菌液,通过采用12株创伤弧菌和130株非创伤弧菌进行特异性实验,12株创伤弧菌呈阳性反应,130株非创伤弧菌呈阴性反应,结果表明VVNo.5抗体具有良好的特异性。在基质添加试验中,通过增菌,最低检出限为2 CFU/25 g样品。结论成功制备了创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体,并将其应用于双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到1×103CFU/mL菌液,与所测试的非目标菌没有交叉反应。

• 单位
  北京大学; 北京农学院; 中华人民共和国北京出入境检验检疫局