磷酸化标签方法检测DNA损伤后HP1α蛋白磷酸化状态

Authors：刘佳; 周光前; 尹献辉; 李雪芹; 王优雅; 胡静仪; 王子梅

Source：华西医学, 2012.

• 蛋白质磷酸化
• 磷酸化标签
• 异染色质蛋白1&alpha
• DNA损伤

目的　通过检测异染色质蛋白1α（HP1α）在DNA损伤后的磷酸化状况，介绍一种用磷酸化标签试剂(phos-tag)检测磷酸化蛋白质的新方法。 方法　取雄雌C57小鼠交配后孕13.5 d胚胎，分离并原代培养小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs），对照组取及实验组(6个损伤时间点)各取2个100mm培养皿的细胞进行实验，实验组细胞用喜树碱（CPT）进行DNA损伤，对照组用等量的二甲基亚砜（DMSO）处理，用掺入磷酸化标签（phos-tag）的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离蛋白并转印，将膜用抗HP1α的抗体孵育，用偶联辣根过氧化物酶的抗体做二抗，通过成像系统检测蛋白。 结果　实验组存在一条与HP1α有明显不同迁移率的磷酸化HP1α条带，与对照组相比DNA损伤后磷酸化HP1α含量一过性增多。 结论　HP1α被DNA损伤诱导为磷酸化状态，提示其可能在DNA修复过程中扮演重要角色。 Phos-tag Western blotting可采用普通抗体检测磷酸化的蛋白，是一种简便易行的检测未知磷酸化蛋白质的新方法。

• Institution
  四川大学华西医院; 2; 四川大学/华西医院; 1; 深圳大学