离体大鼠心肌内质网应激模型构建条件的优化

作者：张改改; 滕旭; 刘越; 吴扬; 宁明; 齐永芬; 尹新华

来源：中国实验动物学报, 2013, (06): 1-7.

• 心脏
• 内质网应激
• 缺血/再灌注损伤
• 组织切片孵育
• 糖调节蛋白78 Heart
• Endoplasmic reticulum stress
• Ischemia/reperfusion injury
• Tissue slice incubation
• Glucoseregulated protein 78

目的探讨构建体外心肌内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)模型的方法及实验条件。方法应用Langendorff灌流装置制作大鼠心脏离体缺血/再灌注模型,采用PowerLab系统持续监测血流动力学参数,Western blot检测缺血(停止灌流)不同时间/再灌注120 min后心肌ERS标志性分子糖调节蛋白(GRP)78的表达,并检测C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测二者mRNA的表达;体外孵育心肌组织切片,分别应用不同浓度的衣霉素(tunicamycin,Tm)和二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)处理3 h和6 h,Western-blot检测心肌GRP78及CHOP的表达。结果与对照组相比,离体灌注心脏缺血40 min/再灌注120 min时,心肌GRP78表达最高(P<0.01),CHOP蛋白、GRP78 mRNA及CHOP mRNA表达均明显升高(P<0.01,P<0.05和P<0.05),同时,各项血流动力学参数受损(均P<0.01);Tm 10μg/mL和DTT 2 mmol/L孵育心肌组织切片3 h时,GRP78表达较对照组显著升高(均P<0.001),CHOP表达亦均明显升高(P<0.05和P<0.01)。结论使用离体大鼠心脏缺血/再灌注和孵育心肌组织切片的方法,均可成功构建体外心肌ERS模型。

• 单位
  清华大学; 北京大学医学部; 哈尔滨医科大学