狼尾蕨基因组DNA提取及SSR反应体系的建立

Authors：贾新平; 叶晓青; 梁丽建; 邓衍明; 佘建明; 孙晓波

Source：江苏农业学报, 2013, 29(06): 1456-1462.

• 狼尾蕨
• DNA提取
• SSR
• 反应体系

为了研究蕨类植物基因组DNA的提取方法及建立适合狼尾蕨的SSR-PCR反应体系,以狼尾蕨为试验材料,利用改良的CTAB方法提取狼尾蕨叶片基因组DNA,分析SSR-PCR反应体系的主要成分(DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和Taq DNA聚合酶)对扩增结果的影响,并对引物的适宜退火温度进行优化。结果表明:引物DB-23的最佳退火温度为54℃;20μl PCR反应体系中,DNA模板浓度为30 ng/μl,引物浓度为1.5μmol/L,Mg2+浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.20 mmol/L,Taq DNA聚合酶加入量为1.5 U。利用建成的SSRPCR反应体系对8个蕨类品种进行扩增,扩增谱带清晰且有较高的多态性,说明该体系稳定可靠。

• Institution
  江苏省农业科学院