野生型及突变型HIV-1 LTR驱动的荧光素酶稳定表达细胞株的建立

作者：刘林; 杨少宗; 林师冠; 王晓辉; 孔垂瑾; 曲喜英; 朱焕章

来源：复旦学报(自然科学版), 2013, (02): 278-283.

• HIV-1
• LTR
• NF-&kappa
• B
• 稳定细胞系 HIV-1
• LTR
• NF-&kappa
• B
• stable cell line

HIV潜伏感染是造成抗病毒疗法无法根除病人体内病毒的主要原因.建立有效的药物筛选模型,是成功筛选高效、低毒性HIV潜伏激活剂的关键.本研究中,我们构建了野生型及κB和TAR顺式元件突变型HIV-1LTR驱动的荧光素酶表达载体,并通过质粒转染人胚肾293细胞,通过G418筛选,获得了稳定表达的细胞克隆.从每个克隆中抽提基因组DNA,进行PCR扩增和序列分析,结果显示:报告载体稳定整合在细胞基因组中.进一步通过TNF-α去处理这些细胞模型,结果显示:10ng/mL TNF-α可以有效地激活野生型LTR和ΔTARLTR细胞,对ΔκB LTR细胞中荧光素酶表达水平没有影响.激活效果还在同一细胞的不同细胞克隆中得到了重复验证.

• 单位
  复旦大学生命科学学院