肝癌双自杀基因逆转录病毒转染体系构建与鉴定

作者：谭铖洸; 林丽珠

来源：国际老年医学杂志, 2018, (06): 265-271+286.

• 基因疗法
• 双自杀基因
• 逆转录病毒载体
• 胸苷激酶基因
• 胞嘧啶脱氨酶基因 Gene therapy
• Double suicide gene
• Retroviral vector
• Thymidine kinase gene
• Cytosine deaminase gene

目的进行肝癌双自杀基因逆转录病毒转移体系的建立及鉴定,为后续将其转染肝癌细胞、并进行抗肝癌细胞株的功能实验和功效研究奠定基础。方法采用基因工程的方法 ,将pWZLneoCDglyTK质粒转化到DH5α感受态菌后,提取质粒DNA,并采用酶切和PCR及A260 nm和A260 nm/A280nm吸光度测定等方法进行分析鉴定;再将其质粒DNA用脂质体介导转染PA317细胞,然后经G418筛选阳性克隆,进行扩增培养PA317/CD+TK细胞,即成功构建含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(E. coli CD)和单状疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)的肝癌双自杀基因逆转录病毒转移体系。结果转化的阳性菌株可在含Amp的...

• 单位
  广州中医药大学