面肩肱型肌营养不良实时荧光定量PCR诊断方法的影响因素分析

作者：苏全喜; 李婉仪; 张成; 熊符; 洪铭范; 刘爱群; 田素娟

来源：军医进修学院学报, 2011, (07): 748-751.

• 肌营养不良,面肩肱型
• 实时荧光定量PCR
• RNaseH酶活性 Muscular Dystrophy,Facioscapulohumeral
• Real-Time Quantitative Pcr
• Rnase H Enzyme Activity

目的分析探讨面肩肱型肌营养不良(FSHD)实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)诊断方法的影响因素。方法通过改变镁离子终浓度、PCR扩增中退火温度、退火时间或延伸时间、RNase H酶用量和活性等,确定FQ-PCR诊断FSHD的最佳反应条件。结果退火温度55℃、时间20s、镁离子终浓度5.0mM、RNase H酶用量100U、RNase H酶在95℃下灭活8min为最佳反应条件,其中RNase H的活性选择对FSHD诊断的特异性影响较大。结论通过降低RNase H酶的活性可提高诊断的特异性,最终确立了FSHD的FQ-PCR基因诊断最佳反应条件。

• 单位
  广东药学院; 中山大学; 中山大学/附属第一医院; 东莞市人民医院; 南方医科大学