顺式高尔基体蛋白GM130影响小鼠卵母细胞纺锤体组装

摘要

目的确定顺式高尔基体蛋白GM130对小鼠卵母细胞纺锤体组装的影响。方法免疫荧光法检测GM130在小鼠卵母细胞发育不同时期的亚细胞定位,并用免疫印迹法半定量检测其表达水平;接着用微管解聚药物诺考达唑处理小鼠MI卵母细胞,明确GM130与微管动力的关系。免疫印迹检测注射GM130特定的寡聚核苷酸(morpholino,MO)后卵母细胞中GM130的表达水平,免疫荧光法检测纺锤体的形态变化及中心体相关蛋白γ-tubulin和Plk1的定位。结果 M130在卵母细胞减数分裂成熟的不同阶段有不同的特异性定位,主要集中分布在生发泡周围、纺锤体的两极和中体及分散于胞浆。GM130在MI和MII期与中心体相关蛋白p-MEK1/2共定位并与纺锤体的组装密切相关。免疫印迹试验表明GM130在卵母细胞发育的各个时期均有表达。降调GM130的表达后,纺锤体组装异常比例升高,且大多数为拉长的纺锤体;第一极体排出率下降,在排出的极体中,大极体的比率升高,并影响γ-tubulin和Plk1的正确定位。结论 GM130可能作为一种微管组织中心相关蛋白调节纺锤体的组装。

关键词