大肠杆菌表达的Taq DNA 聚合酶的纯化

Authors：刘天磊; 薛守斌; 王芳; 朱琳颖; 梁微微; 曲圣轩; 蔡文博

Source：遗传, 2012, 34(3): 371-378.

DOI：10.3724/SP.J.1005.2012.00371

• Taq DNA 聚合酶
• 724 树脂
• 阳离子交换层析

Taq DNA 聚合酶是分子生物学研究中最常用的热稳定DNA 聚合酶之一,与其他热稳定DNA 聚合酶具有相似的特征,其纯化策略不但有潜在的应用前景,也对同类聚合酶的分离具有指导意义.已报道的适宜大量制备Taq 酶的方案所需成本较高,而文章介绍了一种利用国产阳离子交换树脂廉价制备Taq 酶的方案.在本方案中,采用热变性、(NH4)SO4 沉淀与724 离子交换层析分离大肠杆菌表达的Taq 酶,约18 g Na 型树脂干粉一次可回收比活约8 131.98 U/mg、总酶活2.2×105 U、近27.07 mg Taq 酶.纯化的产率可达48.92%,纯化倍数约59.35.所制酶SDS-PAGE 电泳只检测到94 kDa 单一蛋白条带,未检测到DNA 核酸酶污染,与商品酶的PCR扩增能力无区别.此纯化方法成本低,适合实验室一般性的制备和生产应用.

• Institution
  兰州大学