利用串联亲和纯化的方法筛选耻垢分枝杆菌中MutM的相互作用蛋白

作者：范尚华; 周盈张泓泰JoyFleming喻子牛张先恩毕利军

来源：Progress in Biochemistry and Biophysics, 2015, 1-12.

DOI：10.16476/j.pibb.2015.0065

• 耻垢分枝杆菌
• 碱基切除修复
• MutM
• 串联亲和纯化

MutM(formamidopyrimidine-DNA glycosylase，Fpg)是原核生物碱基切除修复系统(BER)中同时具有DNA糖苷酶和脱嘌呤/ 脱嘧啶AP裂解酶活性的一种双功能酶，不但可以识别DNA损伤，而且能切除损伤的碱基，从而参与到许多种损伤的修复过程．除了高致突变率的8-羟基鸟嘌呤(8-oxoguanine，8-oxoG)外，MutM在其他损伤修复中具体作用机制还不清楚．本研究主要以耻垢分枝杆菌(M． smegmatis)为研究对象，利用串联亲和纯化技术和质谱相结合的方法对可能与MutM相互作用的蛋白因子进行发现和鉴定，并于体外用Far-western和GST pull-down方法对鉴定出的蛋白DEAD-box rna helicase、RpsC、UvrA与MutM的相互作用进行了验证．实验结果表明，利用串联亲和纯化方法来发现MutM相互作用的蛋白是切实可行的．本研究为进一步深入研究MutM在其参与的损伤修复中的具体机制提供了切入点．

• 单位
  华中农业大学生命科学技术学院; 2; 中国科学院; 1