围脂滴蛋白基因CRISPR/Cas9载体的活性分析

作者：许祥; 董维鹏; 张少华; 冯晨毅; 刘田福; 燕炯

来源：生物技术通报, 2019, (11): 89-95.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0357

• PLIN1基因
• CRISPR/Cas9
• sgRNA
• 载体构建
• 切割效率 PLIN1 gene
• vector construction
• cleavage efficiency

设计并验证能够靶向切割PLIN1基因的sgRNA,为建立高效的PLIN1基因敲除动物模型奠定基础。利用预测软件设计3条评分较好的sgRNA。添加T7启动子后体外转录相应的sgRNA,构建酶切体系并验证其体外切割活性。构建相应的基因敲除质粒载体,通过电转染将质粒转到3T3-L1前脂肪细胞内并进行诱导分化。RT-PCR法检测细胞中PLIN1 mRNA的表达,Western blot法检测细胞中PLIN1蛋白的表达。成功在体外转录3条PLIN1的sgRNA并构建酶切体系,测得sgRNA-PLIN1-1的切割效率为61.8%±9.0%,sgRNA-PLIN1-2的切割效率为64.1%±9.6%,sgR...

• 单位
  山西医科大学