Clade 2.3.4.4 H5 亚型禽流感 DNA重组质粒的免疫保护效力研究

作者：李炯颉; 梁真洁; 陈普成; 曾显营; 柳金雄; 邓国华; 姜永萍; 陈化兰

来源：中国预防兽医学报, 2021, 1-6.

• DNA疫苗
• Clade.2.3.4.4
• 禽流感病毒
• 免疫效力评估

为研制和更新针对H5亚型禽流感病毒(AIV)流行株的DNA疫苗，本研究将H5亚型AIVClade2.3.4.4分支代表株A/Duck/Guizhou/S4184/2017(H5N6)(简称DK/GZ/S4184/2017(H5N6))的HA基因经密码子优化后定向克隆至载体pCAGGs中构建重组质粒pCA-S4184，将该质粒转染293T细胞后利用间接免疫荧光和westernblot检测，结果显示，该HA蛋白可以在293T细胞中正确表达。将15 μg的重组质粒pCA-S4184肌肉注射免疫3周龄的SPF鸡，3周以后以相同的剂量加强免疫，加强免疫1周后通过鼻腔分别感染10~(5)EID_(50)的同源高致病性AIVDK/GZ/S4184/2017(H5N6)和同分支异源高致病性AIVDK/GD/S1110/2019(H5N6)、DK/GX/1/2018（H5N6）、DK/HuN/SE0110/2018（H5N6）进行攻毒，攻毒之后的观察期为14 d，观察期内每天记录免疫组和对照组鸡的发病和死亡情况，攻毒后第3 d、第5 d和第7 d无菌采集所有鸡的喉头和泄殖腔拭子，采用红细胞凝集试验(HA)检测病毒的滴度。结果显示，重组质粒pCA-S4184可以对致死性同源病毒和同分支异源病毒的攻击提供100%的保护率，且能显著降低攻毒后的病毒载量。随后以15 μg/只剂量的pCA-S4184两次免疫3周龄SPF鸡，免疫后每隔2周采集其翅静脉血检测其HI抗体的动态消长规律，并在首次免疫后的第12周和24周，随机挑取免疫鸡攻击同源病毒，以评估该重组质粒在持续期的免疫保护效果。结果显示，重组质粒pCA-S4184以15 μg/只剂量免疫后HI抗体持续达到24周，抗体水平较高，在1:11至1:64之间，在攻毒后，该质粒可以对同源病毒形成完全保护。本研究为重组质粒pCA-S4184作为防控Clade.2.3.4.4 AI的候选DNA疫苗提供了实验依据。

• 单位
  中国农业科学院