甘蔗F2KP基因的分子改造及其表达载体的构建

作者：王婷; 何炜; 何文锦; 叶冰莹; 陈由强

来源：亚热带农业研究, 2013, (03): 207-211.

• 表达载体构建
• 果糖-6-磷酸
• 2-激酶/果糖-2
• 6-二磷酸酯酶(F2KP)
• 定点突变 construction of expression vector
• fructose-6-phosphate
• 2-kinase /fructose-2
• 6-bisphosphatase(F2KP)
• site-directed mutagenesis

果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酯酶(fructose-6-phosphate,2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase,F2KP)是影响生物碳积累和分配的调控关键酶,同时也是一个具有激酶和酯酶两种催化活性的双功能酶。为筛选出高酯酶酶活性的改造酶分子,本研究通过定点突变与片段缺失方法改造蔗叶F2KP基因,将蔗叶F2KP基因的Asp442、His508和Arg446分别突变为Gly、Ala和Pro,并且将分别缺失F2KP基因的酯酶的大部分和激酶的大部分构建F2KP激酶重组片段和酯酶重组片段,将突变后的基因与表达载体pPIC9K双酶切后进行连接,构建重组质粒。经过菌落PCR和双酶切重组质粒均证明已将目的片段转到酵母表达载体pPIC9K内。

• 单位
  生命科学学院; 福建省农业科学院; 福建师范大学