14-3-3ε蛋白磷酸化修饰的生物质谱分析

作者：李子健; 何鑫; 潘晨宇; 刘宁

来源：分析化学, 2013, (11): 1653-1658.

• 质谱
• 14-3-3&epsilon
• 蛋白
• 磷酸化修饰 Mass spectrometry
• 14-3-3&epsilon
• protein
• Phosphorylation

本研究在HEK293细胞中过表达带有6个组氨酸标签的14-3-3ε蛋白,经镍离子亲和树脂富集和凝胶电泳等生物化学方法分离并富集目标14-3-3ε蛋白。利用特异性胰蛋白酶对14-3-3ε蛋白进行胶内水解后,采用TiO2亲和层析法,对蛋白水解混合物中的磷酸化修饰肽段进行富集,并利用生物质谱技术分析鉴定了14-3-3ε蛋白中的磷酸化修饰位点。结果表明,利用生物质谱技术,结合人工解谱的方法,能够高效、准确地鉴定HEK293细胞中过表达的14-3-3ε蛋白中的磷酸化修饰肽段的结构信息,确定了14-3-3ε蛋白中的12个磷酸化修饰位点,其中多个位点的磷酸化修饰为首次发现。

• 单位
  北京大学; 化学学院; 吉林大学