Error-prone PCR致哈茨木霉几丁质酶突变的条件优化

作者：王傲雪; 李微; 陈秀玲; 李景富

来源：东北农业大学学报, 2013, (10): 134-138.

• Error-prone PCR
• 哈茨木霉几丁质酶
• Chit42
• 突变 Error-prone PCR
• Trichoderma harzianum chitinase
• Chit42
• mutation

运用Error-prone PCR对哈茨木霉几丁质酶基因(Chit42)进行人工突变。在常规PCR基础上,通过提高体系中Mg2+浓度,适当加入一定浓度Mn2+,调节四种dNTP(dATP、dGTP、dCTP、dGTP)浓度,得到产生明显突变效果的试验条件。在Error-prone PCR中,使用5.0 mmol·L-1Mg2+,0.5 mmol·L-1Mn2+,0.04 mmol·L-1dATP和dGTP,1.5 mmol·L-1dTTP和dCTP进行扩增后,随机挑选10个克隆测序,累积13 370个碱基,检测到57个突变,平均突变率为0.4%。为产生优良突变株、酶分子定向进化奠定基础。

• 单位
  生命科学学院; 东北农业大学