丝素蛋白和乳酸-己内酯共聚物纳米纤维支架构建组织工程化角膜上皮的实验研究

摘要

目的评估兔角膜缘上皮细胞在丝素蛋白(SF)和乳酸-己内酯共聚物(PLCL)复合纳米纤维薄膜上的黏附、增殖和分化情况,探讨SF-PLCL复合纳米纤维薄膜作为组织工程角膜上皮支架材料的可行性。方法利用六氟异丙醇(HFIP)作为溶剂,配制浓度为8%的SF和PLCL共混物(质量比25∶75)的纺丝溶液。通过静电纺丝技术制备纳米纤维膜。将体外培养的第一代兔角膜缘上皮细胞种植于SF-PLCL纳米纤维薄膜上进行复合培养。利用扫描电镜观察SF-PLCL纳米纤维薄膜的表面形态及细胞材料复合物的表面形貌;利用免疫荧光染色分析角膜上皮细胞标记物K3的表达情况;通过细胞活力检测观察细胞在材料上的生长分布规律。结果 SF-PLCL纳米纤维薄膜的平均纤维直径为(715±186)nm,材料具有较好的透明度。扫描电镜显示角膜缘上皮细胞在材料上保持正常上皮细胞的铺路石样形态,黏附生长良好,细胞表面布满微绒毛,细胞间紧密联接;免疫荧光染色表明角膜缘上皮细胞在材料上可分化为成熟的角膜上皮细胞。细胞活力检测证实角膜缘上皮细胞在材料上生长良好,均匀分布,形成多层层化结构。结论角膜上皮细胞与SF-PLCL纳米纤维膜的生物相容性良好,SF-PLCL纳米纤维膜是一种潜在、合适的组织工程角膜上皮支架材料。

关键词