编辑PFF细胞的P53基因及其信号通路中重要基因的表达分析

作者：乔传民; 刘为伟; 杨强; 江浩筠; 黄路生; 幸宇云

来源：畜牧兽医学报, 2019, (11): 2215-2225.

• CRISPR-Cas9
• 猪
• P53
• 单链寡核苷酸
• 基因编辑 CRISPR-Cas9
• pig
• SSODNs
• gene editing

旨在编辑PFF细胞的P53基因,并分析其信号通路中重要基因的表达。本研究首先将设计好的两条sgRNAs装载入PX459 V2.0质粒中,订购两条携带241W、242S、266H突变位点的单链寡核苷酸(SSODN)作为供体DNA(一条带有前两个突变,另一条带有266H突变),利用电转法将打靶载体和SSODNs共转染到PFF细胞中,筛选单克隆细胞后检测打靶区域的编辑情况,并检测编辑细胞中信号通路重要基因(MDM2、FAS、WIP1、BAX、P21和DD1α)的表达及检测编辑细胞的增殖能力。结果表明,在筛选到的107个单克隆细胞中,分别有4个为两个位点(R241和R242)纯合子和杂合子编辑型,1个...

• 单位
  江西农业大学