摘要
目的研究Toll样受体2(TLR2)激动剂Pam3CSK4对体外培养人牙髓细胞(hDPC)表达细胞因子的影响。方法特异性配体Pam3CSK4体外活化hDPC表面TLR2,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测不同时间处理后hDPC内白细胞介素6(IL-6)、IL-8、IL-1β及半胱氨酸-X-半胱氨酸趋化因子配体10(CXCL10)mRNA的表达水平;双抗体夹心ELISA法检测上述细胞上清液中IL-6、IL-8蛋白的表达水平;激光共聚焦观察TLR2-核因子κB(NF-κB)信号通路关键蛋白p65的胞内分布情况。结果1μg/ml Pam3CSK4处理hDPC 0、4、8、12 h,荧光定量PCR结果显示,除IL-6mRNA表达水平最先于4 h达峰值外(P=0.006),IL-8、IL-1β及CXCL10 mRNA表达水平均于4 h开始升高,8 h达峰值(P<0.001);双抗体夹心ELISA法显示,hDPC上清液中IL-6及IL-8的蛋白表达于4 h开始升高,8~12 h趋于平稳。激光共聚焦显微镜发现,表达绿色荧光的NF-κB p65蛋白主要位于对照组细胞质,经1μg/ml Pam3CSK4刺激75 min后转移至胞核。结论特异性配体Pam3CSK4通过结合hDPC表面TLR2启动细胞内NF-κB信号通路进而激活其转录作用,诱导hDPC表达多种细胞因子,从而参与牙髓炎的早期免疫调控。
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单位中山大学光华口腔医学院