红笛鲷tdt基因融合蛋白原核表达条件的优化及纯化

作者：黄瑜; 张雪利; 鲁义善; 简纪常; 吴灶和; 黄浦江; 周泽军

来源：广东海洋大学学报, 2013, (01): 44-49.

• 红笛鲷
• tdt基因
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• 纯化
• Western blot分析 Lutjanus sanguineus
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• prokaryotic expression
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• Western blot analysis

克隆编码红笛鲷(Lutjanus sanguineus)末端脱氧核糖核酸转移酶TdT蛋白(Terminal deoxynucleotidyl transferases)成熟肽基因序列,并与pET-32a(+)载体连接,构建原核表达载体pET-32a-TdT,再将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。运用传统方法优化诱导条件,以提高重组融合蛋白的表达效率。SDS-PAGE分析表明,37℃、0.7 mmol/L IPTG条件下诱导4 h后,TdT融合蛋白的表达量最大,分子质量大小与预测值相符,该蛋白主要以包涵体形式存在。利用HisTrap ...

• 单位
  仲恺农业工程学院; 广东海洋大学