kinsenoside衍生物抗氧化活性及对AGEs引起的HUVEC损伤的保护作用研究

作者：韩磊^*

来源：硕士, 华侨大学, 2013-03-27.

• kinsenoside
• 抗氧化
• 晚期糖基化终末产物
• 人脐静脉内皮细胞

目的从已合成的多个金线莲糖苷（kinsenoside）衍生物中筛选出具有抗氧化活性的化合物，并进一步考察这些化合物的抗氧化效应；通过晚期糖基化终末产物（AGEs）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤模型，研究这些化合物对AGEs损伤的HUVEC的保护作用及其机制。方法1.建立H2O2诱导的PC12细胞损伤模型，用多个kinsenoside衍生物进行干预后，MTT方法检测PC12细胞的存活率。以细胞存活率大小作为筛选抗氧化活性化合物的指标。2.利用分光光度法检测H2O2诱导损伤的PC12细胞内超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性，荧光染料2’，7’-二氯二氢荧光素二乙酯（DCFH-DA）测定损伤PC12细胞内活性氧（ROS）水平，彗星实验检测损伤PC12细胞内DNA的损伤，及损伤的PC12细胞经筛选出的kinsenoside衍生物干预后，细胞内SOD和CAT活性、ROS水平及细胞内DNA损伤情况。3.建立AGEs诱导的HUVEC损伤模型，通过Western blotting方法检测损伤HUVEC中转录因子NF-κB的活化水平，通过ELISA方法检测培养基上清液中粘附分子ICAM-1、趋化因子MCP-1的含量，及筛选出的kinsenoside衍生物的干预作用。结果1.抗氧化活性化合物筛选结果显示，化合物R-7和XJ-8干预后，H2O2损伤的PC12细胞的细胞存活率以剂量依赖的方式提高，显示出较好的抗氧化效应。而化合物XJ-3和XJ-5不能有效提高受损的PC12细胞的细胞存活率。提示，这两个化合物没有显示出明显的抗氧化活性。细胞毒性检测实验显示，化合物R-7和XJ-8对正常PC12细胞的生长无明显影响，提示，化合物R-7和XJ-8对正常细胞生长无毒性作用。2.抗氧化实验结果显示，化合物R-7和XJ-8干预受损的PC12细胞后，均能够以剂量依赖的方式显著提高细胞内SOD和CAT活性，降低细胞内ROS水平，减轻氧化应激造成的DNA损伤。3. AGEs能够明显降低HUVEC细胞的存活率，化合物R-7和XJ-8干预后，均能显著抑制HUVEC转录因子NF-κB的活化，降低细胞培养上清中粘附分子ICAM-1、趋化因子MCP-1的含量。结论本实验结果表明化合物R-7和XJ-8能有效提高H2O2诱导损伤的PC12细胞中抗氧化酶的活性，降低细胞内ROS水平，减轻氧化应激造成的PC12细胞内DNA损伤程度，而显示出显著的抗氧化作用。化合物R-7和XJ-8能够抑制AGEs诱导损伤的HUVEC中NF-κB的激活，降低损伤的HUVEC中炎症因子的表达水平。化合物R-7和XJ-8能否有效治疗糖尿病血管病变还需进一步研究。