耐热、高产重组人Cu,Zn-SOD改构体的构建及纯化方法的研究

作者：张琨; 张月娟; 王琰; 张志敏; 马晓迅; 万一

来源：西北大学学报(自然科学版), 2010, (05): 837-842.

• 重组人Cu
• Zn-SOD
• 定点突变
• 纯化
• 热稳定性 the recombined hCu
• Zn-SOD
• sited-directed mutagenesis
• purification
• thermostability

目的通过对天然人Cu,Zn-SOD基因的改造,得到热稳定性、活性产量提高的重组人Cu,Zn-SOD(rhCu,Zn-SOD)改构体,并进行蛋白纯化方法的研究。方法重叠PCR技术将天然hCu,Zn-SOD的Cys6突变为A la6,Cys111突变为Ser111,构建重组质粒pET22b-rmhCu,Zn-SOD6A la,111Ser,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后SDS-PAGE分析改构体蛋白的表达,并进行W estern blot鉴定;研究改构体蛋白的纯化方法,HPLC检测蛋白纯度,比较rhCu,Zn-SOD及其改构体的活性和热稳定性。结果成功构建了rmhCu,Zn-SOD...

• 单位
  陕西省微生物研究所; 西北大学